免疫印跡(immunoblotting)又稱(chēng)蛋白質(zhì)印跡(Western blotting),是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎上發(fā)展起來(lái)的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,現已成為蛋白分析的一種常規技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。結合化學(xué)發(fā)光檢測,可以同時(shí)比較多個(gè)樣品同種蛋白的表達量差異。
一、基本原理
將混合抗原樣品在凝膠板上進(jìn)行單向或雙向電泳分離, 然后取固定化基質(zhì)膜與凝膠相貼。在印跡紙的自然吸附力、電場(chǎng)力或其它外力作用下, 使凝膠中的單一抗原組份轉移到印跡紙上, 并且固相化。最后應用免疫覆蓋液技術(shù)如免疫同位素探針或免疫酶探針等, 對抗原固定化基質(zhì)膜進(jìn)行檢測和分析。
二、基本步驟
免疫印跡法( 以抗原分析為例)基本上可分為抗原分離、抗原印跡和抗原檢定三個(gè)步驟。在每一步中因采用的具體實(shí)驗方法不同, 可構成多種免疫印跡分析系統。
三、優(yōu)點(diǎn)
免疫印跡法是一項分析抗原、抗體的技術(shù)。它具有下列優(yōu)點(diǎn):
1、 濕的固定化基質(zhì)膜柔韌, 易于操作。
2 、固定化的生物大分子可均一的與各種免疫探針接近, 不會(huì )象凝膠那樣受孔徑阻隔。
3、 免疫印跡分析只需少量試劑。
4、 孵育、洗滌的時(shí)間明顯減短。
5、可同時(shí)制作多個(gè)拷貝, 用于多種分析和鑒定。
6、結果以圖譜形式可長(cháng)期保存。
7、 免疫探針可通過(guò)降低PH值等方法, 象抹去錄音磁帶一樣將探針抹掉, 再換用第二探針進(jìn)行分析檢測。免疫印跡法的應用范圍及優(yōu)點(diǎn)不僅局限于此, 它必將隨著(zhù)這一方法的深入研究而不斷發(fā)展和完善。
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